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实验室核酸检测全流程
发布时间:2021-07-20   点击次数:2675次

冬季以来,1情再次变成“常态”,各地出现不同程度和规模的1情以来,每天都有成千上万份等待进行检测的核酸样本。这些样本在实验室是如何被检测出来的?

 

根据危险度等级,包括传染病原的传染性和危害性,上将生物实验室将实验室分为P1、P2、P3和P4四个等级。P1-4实验室可承担的工作也根据这一安全等级进行划分,其严格等级从低到高。P3实验室又称防护实验室,适用于处理对人体、动植物或环境具有高度危害性,通过直接接触或气溶胶使人传染上严重甚至是致命的疾病,或对动植物和环境具有高度危害的致病因子,通常有预防和治疗措施。
 
核酸检测在实验室内是如何进行的?

大致可分为:检测前的准备工作——核对样本信息——样本灭活——开盖加样和核酸提取——PCR反应体系配制——核酸扩增检测——检测完成——高压灭菌。

 
检测前
 

打开样本前,检测人员需穿戴好个人装备防护装备,如护目镜、面屏、双层医用乳胶手套、防水靴套,每个步骤不能出错

 
测中
 
1、在实验室核心区域内使用75%酒精对送样箱进行外表面消毒,消毒完毕后核对被检测样本的姓名、年龄、性别等信息进行核对。

2、将样本放在水浴箱中进行半个小时的56℃的高温灭活,使病毒蛋白失去生理活性,在不影响病毒蛋白基因序列的前提下,使病毒失去感染、致病和繁殖能力,保证检测的安全性。

3、实验员拿到灭活后的样本时,先是进行振荡,尽量让拭子上的病毒洗脱在培养基溶液中,第二步是进行5分钟的沉淀。第三部进行开盖加样,这一步必须实行人工操作,并且需要两人高度配合完成。一人拧开样本罐的盖子,另一人拿微量移液器在样本罐中吸取微量溶液,放到另一个提取管里,再拧上管盖。

核酸提取可以使用仪器辅助,但由于比对需要,往往要加以人工操作,需要反复进行离心、加试剂、洗涤等10多个步骤。其中,需要打开管盖的操作就达7次以上,完成一例人工核酸提取需要50分钟左右

4、走出核心试验区,开始进行PCR反应体系配制,将提取的病毒核酸加入到核酸扩增检测试剂中。

5、将配制好的PCR反应物放置在荧光定量PCR仪上。在电脑上设置PCR反应条件,运行仪器,开始核酸扩增检测。

 

检测后

检测人员需要实时关注检测情况,约1.5小时后,核酸扩增完成,进行检测结果判读。至此,整个流程完成,大概4小时。

也是非常重要的一步就是对污染物的高压灭菌处理。实验过程产生的污染物通过高压灭菌后,按普通医疗垃圾处理。
可以说,核酸检测的过程也是与时间赛跑的过程。尤其是需要大规模进行核酸检测的场景中,运输到实验室进行检测显然要付出较高的时间成本。可移动实验室的运用为提高核酸检测效率提供了行之有效的方法。
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